История развития иммунологических исследований в НИИ урологии

Вячеслав Николаевич Синюхин, д.м.н., заведующий лабораторией иммунодиагностики НИИ урологии

Вячеслав Николаевич Синюхин, д.м.н., заведующий лабораторией иммунодиагностики НИИ урологии

Днем создания лаборатории иммунодиагностики можно считать 1 сентября 1984 года, когда приказом директора института Н.А. Лопаткина были созданы первые лабораторные службы. В состав подразделения вошли все сотрудники лаборатории иммунологии при кафедре урологии 2 МОЛГМИ им. Н.И. Пирогова во главе с выдающимся иммунологом Н.В. Мах линым. В составе лаборатории были группы, занимающиеся клеточным, гуморальным иммунитетом, фагоцитозом, опухолевыми маркерами, HLA-типированием, гибридомными технологиями. В ней, наряду с проведением фундаментальных исследований, решались прикладные задачи, необходимые для урологии и оперативной нефрологии. В то время были определены направления прикладной иммунологии в урологии, которые продолжают разрабатываться до настоящего времени. Это подтверждают статьи, опубликованные в научных журналах. Например, статьи Н.В. Махлина с соавторами «Иммуносемиотика урологических заболеваний» и «Особенности протеинурии в дифференциальной диагностике латентного пиелонефрита и гломерулонефрита» по существу определили все направления иммунологических исследований в отечественной урологии. Статьи А.Д. Бхатта и Н.В. Махлина «Клинико-иммунологическое исследование больных нефролитиазом», «Клинико-иммунологическое исследование уроонкологических больных», «Клинико-иммунологические исследования больных аденомой предстательной железы», А.Г. Пугачева с соавторами «К патогенезу ранних послеоперационных осложнений у детей», Н.А. Лопаткина с соавторами «Сверхострое отторжение аллотрансплантированной почки», Л.А. Харламовой с соавторами «Прогностическое значение пред существующих лимфотоксических антител при аллотрансплантации трупной почки с отрицательным специфическим кросс-матчем» заложили фундамент тех исследований, которые продолжаются до настоящего времени. Интересны работы, проводившиеся совместно с отделом андрологии. Они были посвящены аутоиммунному бесплодию, аутоиммунному и аллергическому простатиту. На эти темы сотрудниками института были защищены диссертации.

Лаборатория сотрудничала и с другими учреждениями. Например, совместные исследования с профессором кафедры акушерства и гинекологии 2 МОЛГМИ З.В. Васильевой привели к решению многих проблем диагностики и лечения пиелонефрита у беременных, а работы Ю.Н. Букаева об особенностях протеинурии при физических нагрузках решили часть проблем спортивной медицины. Работы Ф.В. Березина положили в нашей стране начало исследованиям по влиянию наркоза, операционной травмы, послеоперационного периода на иммунитет у урологических больных.

Лаборатория выпустила несколько методических рекомендаций, которые до сих пор широко используются в практической медицине. Это прежде всего «Уропротеины в диагностике урологических заболеваний» (Н.В. Махлин, С.Б. Городецкая, И.М. Арефьев, 1988 г.) и «Белки нормальной и патологической мочи. Классификация протеинурий» (1992 г.). В этих работах подробно описан метод селективности протеинурии, позволяющий на основании оценки экскреции различных белков крови с мочой, провести оценку нарушений процессов фильтрации и реабсорбции белковых структур почками, провести дифференциальную диагностику между пиелонефритом и гломерулонефритом, оценить состояние трансплантированной почки, прогнозировать возможность возникновения реакции отторжения. Большой интерес представляли методические указания И.И. Дзержинской и А.Ф. Даренкова, посвященные диагностике гнойно-воспалительных заболеваний в уронефрологии на основании активации рецепторного аппарата нейтрофилов микробным агентом и выявления ранних розеткообразующих нейтрофилов. Основополагающей была работа «Способ диагностики острого сепсиса». Метод позволял выявлять уже доклинические проявления болезни. Авторы пришли к выводу, что разработанный метод необходимо применять для определения активности воспалительного процесса, прогнозирования его течения у конкретного больного, определения оптимальных патогенетических мероприятий, имеющих конечной целью коррекцию состояния, устранение выявленных нарушений. Исследование было завершено защитой докторской диссертации И.И. Дзержинской и оформлением целого ряда патентов.

Особо следует отметить работу группы гибридомных технологий: ее сотрудникам удалось разработать отечественные наборы реактивов для определения циклоспорина А, диагностики хламидийной инфекции и вируса простого герпеса, целого ряда опухолевых маркеров.

Появление метода цитофотометрии позволило завершить научные разработки, начало которым положено много лет назад. В первую очередь были продолжены исследования по влиянию ХПН на иммунитет. Как известно, в крови больных с хронической почечной недостаточностью накапливается в высоких концентрациях целый ряд субстанций, которые могут влиять на иммунитет. Мы выделили и очистили часть этих соединений, и у них были обнаружены антипролиферативные и апоптоз-индуцирующие свойства, которые, с нашей точки зрения, являются важными механизмами иммуносупрессии при ХПН. Отдельная часть наших исследований была посвящена изучению функционального состояния лимфоцитов при ХПН. Выявлено, что существует четкая взаимосвязь между концентрацией дигоксиноподобных факторов, накапливающихся при уремии, и торможением реакции бласттрансформации при ХПН.

Был проведен анализ состояния иммунитета при воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей. При анализе субпопуляций и апоптоза лимфоцитов при хроническом пиелонефрите в стадии обострения было выявлено существенное увеличение содержания лимфоцитов с фенотипом СД4 +СД25+, при этом в сыворотке наблюдалось повышение содержания интерлейкина 6 и 8, неоптерина, растворимого рецептора интерлейкина 2. При этом наблюдалось снижение индукции активационного апоптоза при инкубации лимфоцитов. Было установлено, что при остром пиелонефрите характер иммуносупрессии и гиперергической реакции иммунной системы определяется выработкой NK-T клеток и регуляторных Т-лимфоцитов(CD4+ CD25+), а также изменением соотношения поздних активационных маркеров, индекса завершенности фагоцитоза, отношения провоспалительных и противовоспалительных интерлейкинов. Оказалось, что повышенный апоптоз Т-лимфоцитов у больных острым пиелонефритом является одним из основных прогностических факторов тяжелого течения заболевания (диссертация д.м.н. Ходыревой Л.А.).

Проведено исследование иммунного статуса и содержания провоспалительных интерлейкинов у больных хроническим простатитом. Установлено, что у пациентов с наиболее тяжелым течением воспалительного процесса наблюдается повышение провоспалительных интерлейкинов и фенотипический профиль, определяемый как повышение уровня Т-хелперов 2.

Известно, что причиной гнойных осложнений в хирургии является нарушение системы регуляции иммунным ответом. Считают, что у больных с анергией наибольшее количество гнойных осложнений и большая смертность в послеоперационном периоде. Это связано или с врожденным дефицитом интерлейкина-1-бета, или гиперпродукцией антагониста интерлейкина-1-бета и целого ряда других факторов. При гиперпродукции интерлейкина-1-бета высока вероятность возникновения септического шока. Нами было установлено, что это наиболее часто наблюдается у больных со снижением СД4+СД25+ лимфоцитов и гиперпродукцией интерлейкина 6. В лаборатории были продолжены исследования по проведению дифференциальной диагностики между гнойно-воспалительным процессом и реакцией на операционную травму. Было установлено, что у больных с наиболее тяжелым течением послеоперационного периода выявляется повышение концентрации ЕК-Т лимфоцитов, что сочетается с более высоким содержанием СД3+ и HLADR+Т-лимфоцитов. Данный характер иммунной реакции, повидимому, связан с тяжелой антигенной нагрузкой.

В ближайшее время в лаборатории планируется ряд исследований. Во-первых, это изучение циркулирующих в крови маркеров апоптоза. Безусловно, многие из них не обладают органной или опухолевой специфичностью, что ограничивает их ценность в процессах скрининга опухолевых заболеваний. Однако их исследование может принести огромную пользу в дифференциальной диагностике, определении стадии и прогноза течения онкологического заболевания. Определение содержания циркулирующих маркеров апоптоза позволяет быстро оценить эффект проводимой терапии. Наиболее интересны в этом отношении растворимый Fas-рецептор, растворимый Fas-лиганд, фрагменты цитокератина 19, тканевой полипептидный антиген, тканевой полипептидный специфический антиген, фрагменты нуклеосомальной ДНК.

Планируется налаживание методик для разработки методов преодоления Т-клеточной анергии, вызванной опухолевыми клетками. Показано, что на поверхности опухолевых клеток в результате мутации исчезают костимуляторы типа СД80,СД86. Это приводит к исчезновению Т-клеточного рецептора и блокаде иммунного ответа.

В настоящее время разрабатываются методики переноса в свои (аутологичные) Т-клетки гена, контролирующего этот рецептор, что приводит к преодолению опухолевой толерантности и формированию иммунного ответа на опухолевую клетку. То есть в этой ситуации начинают работать дендритные вакцины и цитокины (например, интерлейкин-альфа при раке почки). Такой подход позволяет лечить не опухоль, а раковую болезнь. Над чем нужно еще работать? Перспективны исследования естественных антибиотиков (катионные белки лейкоцитов и эпителиальных клеток), получивших название дефензинов. Это универсальные противовирусные и противобактериальные альфа-, бетаи тета-дефензины. Считают, что к ним не вырабатывается резистентность, они являются хемокинами для дендритных клеток и способны запускать иммунный ответ. Работают они как детергенты, проделывая дыры в мембране бактерий. Также интересна разработка критериев дифференциальной диагностики гнойно-воспалительных заболеваний в послеоперационном периоде и постагрессивной реакции, оценка степени выраженности хирургической агрессии. В настоящее время появились новые подходы к определению степени травматичности операции, основанные на динамике изменения лейкоцитарного СД 64.

К.м.н. Харламова Л.А. проводит иммунологическое исследование на проточном цитометре
К.м.н. Харламова Л.А. проводит иммунологическое исследование на проточном цитометре