Ассоциация мочекаменной болезни у пациентов с различными состояниями семейного анамнеза по уролитиазу с полиморфизмами его кандидатных генов в российской популяции

Мочекаменная болезнь (МКБ) занимает одно из ведущих мест в структуре урологических заболеваний по частоте встречаемости, частоте обращений за скорой медицинской помощью и госпитализаций [1, 2]. По данным официальной статистики, в 2012 году показатель заболеваемости уролитиазом на 100 тыс. населения по Российской Федерации составил 550,5, а абсолютное число зарегистрированных пациентов – 787 555, при этом прирост количества заболевших по сравнению с 2002 г. составил 25,1% [3]. Рецидивы мочекаменной болезни после различных оперативных вмешательств в течение 5 лет могут иметь место у половины пациентов [4, 5]. Несмотря на то, что известен немалый перечень причин, ведущих к развитию уролитиаза, увеличение его распространенности практически во всех странах мира указывает на необходимость поиска новых факторов риска камнеобразования [6].

Считается, что в основе любого патологичекого процесса лежит взаимодействие генов человека и факторов внешней среды [7]. Давно изучено возникновение МКБ при наследственно детерменированных нарушениях обмена веществ: глицинурии, ксантинурии, первичной оксалурии, цистинурии, однако эти заболевания встречаются редко [8]. В то же время по данным литературы у 40-50% пациентов с МКБ обнаруживают отягощенный семейный анамнез по этому заболеванию [1, 9].

В последнее десятилетие основным направлением изучения генетических факторов риска развития МКБ стало выявление ассоциации полиморфизма того или иного гена с МКБ. Результатами подобных исследований является установление наличия или отсутствия ассоциации полиморфизма гена с МКБ. Изучение таких ассоциаций имеет большое значение для понимания патогенеза заболевания и выбора тактики ведения больных уролитиазом.

В нашей стране в ФГБУ «НИИ урологии» Минздрава России в течение нескольких лет проводится исследование по поиску полиморфных вариантов кандидатных генов мочекаменной болезни и выявлена связь между полиморфизмом гена VDR и мочекаменной болезнью в российской популяции. Для генов TNFRSF11B, ESR1, KL, CASR такой зависимости обнаружено не было [10].

Monico C. et al. [11] и Soleimani M. [12] исследовали ген SLC26A6 (rs2310996) и роль его полиморфизмов в развитии МКБ. Chou Y. et al. [13] изучали ген ORAI1 (rs7135617) и показали, что полиморфизм гена ORAI1 может являться генетическим фактором риска возникновения и рецидива МКБ. При этом авторы не изучали роль полиморфизмов генов при различных состояниях семейного анамнеза указанного заболевания. Однако среди пациентов с уролитиазом есть больные, имеющие здоровых родственников, и пациенты с отягощенным семейным анамнезом. Изучение связи МКБ с полиморфизмами ее кандидатных генов с учетом выше названных анамнестических данных имеет большое значение для выявления групп риска, прогнозирования, профилактики и метафилактики заболевания.

Целью данного исследования явился поиск полиморфных вариантов генов, ассоциированных с мочекаменной болезнью в российской популяции у больных без и с семейной кластеризацией уролитиаза.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

С помощью методов генетического анализа обследовано 125 пациентов с МКБ (основная группа) и 188 соматически здоровых человек из общей российской популяции (контрольная группа). В основной группе выделены 43 пациента со здоровыми родственниками (первая подгруппа) и 82 – с отягощенной наследственностью по МКБ (вторая подгруппа). В первой подгруппе было 27 мужчин (62,8%) и 16 женщин (37,2%), во второй подгруппе 52 мужчин (63,4%) и 30 женщин (36,6%).

Для проведения анализа полиморфных ДНК-маркеров в кандидатных генах у пациентов с уролитиазом и в контрольной группе были созданы две коллекции ДНК, выделенной из венозной крови обследуемых лиц, посредством стандартного фенолхлороформного метода или с использованием набора AxyPrepBlood Genomic DNA Miniprep Kit («Axygene», США). Осуществлен анализ полиморфных вариантов трех кандидатных генов МКБ: гена мембранного анионного транспортера семейства 26 (SLC26A6, rs2310996), гена фактора некроза опухолей 11 (TNFSF11, rs9525641), гена модулятора активатора высвобождения кальция 1 (ORAI1, rs7135617).

Полиморфные варианты анализируемых генов определяли методом ПЦР в режиме реального времени с использованием тест-систем компании «Applied Biosystems» в контрольной группе и у больных уролитиазом: в подгруппе пациентов со здоровыми родственниками и в подгруппе больных с семейной кластеризацией МКБ. При расчетах объединяли генотипы по аллелю Т. Статистический анализ осуществляли с помощью метода углового преобразования Фишера.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенные исследования позволили установить спектр и частоты встречаемости вариантов генотипов и аллелей 3 кандидатных генов мочекаменной болезни в общей российской популяции (контрольной группе) и в двух подгруппах пациентов с уролитиазом: со здоровыми родственниками и с отягощенным семейным анамнезом и провести их сравнительный анализ

В общей российской популяции (контрольная группа) при определении полиморфизма гена SLC26A6 встречаемость генотипов следующая: T/T и T/C – 99,5%, C/C – 0,5%. Встречаемость аллелей: T – 88,6%; C – 11,4%. Для гена TNFSF11 встречаемость генотипов составляет: T/T и С/Т – 74,5%; C/C – 25,5%. Встречаемость аллелей: T – 48,9%; C – 51,1%. Для гена ORAI1 встречаемость генотипов следующая: G/T и T/T – 86,8%; G/G – 13,2%. Встречаемость аллелей: T – 61,4%; G – 38,6% (табл. 1).

У пациентов с МКБ со здоровыми родственниками (первая подгруппа) при определении полиморфизма гена SLC26A6 встречаемость генотипов следующая: T/T и T/C – 100,0%; C/C – 0%. Встречаемость аллелей: Т – 91,9%; С – 8,1%. При статистическом анализе для полиморфизма гена SLC26A6 выявлено, что отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборке пациентов с МКБ являются недостоверными: p= 0,815, отличия в частоте аллелей недостоверны: p= 0,112. Для гена TNFSF11 встречаемость генотипов составила: T/T и С/Т – 74,4%; C/C – 25,6%. Встречаемость аллелей: Т – 47,7%; С – 52,3%. При статистическом анализе для гена TNFSF11 выявлено, что отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборке пациентов с МКБ безсемейной отягощенности в анамнезе являются недостоверными: p= 0,153, отличия в частоте аллелей недостоверны: p= 0,833. Для полиморфизма гена ORAI1 встречаемость генотипов следующая: G/T и T/T – 76,7%; G/G – 23,3%. Встречаемость аллелей: Т – 54,7%; G – 45,3%. При статистическом анализе для гена ORAI1 выявлено, что отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборке пациентов с МКБ являются достоверными: p= 0,048, отличия в частоте аллелей недостоверны: p= 0,250 (табл. 2).

Таблица 1. Спектр и частота встречаемости генотипов и аллелей кандидатных генов уролитиаза в общей российской популяции (контрольной группе) с объединением генотипов по аллелю Т

Таблица 2. Спектр и частоты встречаемости генотипов с объединением генотипов по аллелю Т и аллелей кандидатных генов уролитиаза у пациентов с МКБ без семейной отягощенности анамнеза

У пациентов с отягощенным семейным анамнезом по МКБ (вторая подгруппа) при определении полиморфизма гена SLC26A6 встречаемость генотипов следующая: T/T и T/C – 100,0%; C/C – 0% . Встречаемость аллелей: T – 86,6%; C – 13,4%. При статистическом анализе для гена SLC26A6 выявлено, что отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборке пациентов с МКБ с семейной кластеризацией являются недостоверными: p=0,697, отличия в частоте аллелей недостоверны: p=0,089. Для гена TNFSF11 встречаемость генотипов следующая: T/T и С/Т – 79,3%; C/C – 20,7%. Встречаемость аллелей: T – 56,1%; C – 43,9%. При статистическом анализе для гена TNFSF11 выявлено, что отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборке пациентов с МКБ с семейной кластеризацией являются недостоверными: p= 0,088, отличия в частоте аллелей недостоверны: p= 0,126. Для гена ORAI1 встречаемость генотипов следующая: G/T и T/T – 75,6%; G/G – 24,4%. Встречаемость аллелей: T – 53,0%; G – 47,0%. При статистическом анализе для гена ORAI1 выявлено, что отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборке пациентов с МКБ с семейной кластеризацией являются достоверными: p=0,012, отличия в частоте аллелей недостоверны p= 0,070 (табл. 3).

Таким образом, отличия в частоте генотипов в контрольной выборке и выборках пациентов с МКБ в российской популяции являются достоверными только в случае полиморфизма в гене ORAI1. Связь выявлена для групп пациентов без семейной и с семейной кластеризацией уролитиаза.

Таблица 3. Спектр и частоты встречаемости генотипов с объединением генотипов по аллелю Т и аллелей кандидатных генов уролитиаза у больных МКБ с семейной отягощенностью анамнеза

ВЫВОДЫ

Существует связь между полиморфными вариантами гена модулятора активатора высвобождения кальция 1 (ORAI1, rs7135617) и мочекаменной болезнью у пациентов со здоровыми родственниками и больных с отягощенным семейным анамнезом по уролитиазу в российской популяции. Зависимости между мочекаменной болезнью и полиморфизмами гена мембранного анионного транспортера семейства 26 (SLC26A6, rs2310996) и гена фактора некроза опухолей 11 (TNFSF11, rs9525641) не обнаружено. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в развитии уролитиаза в российской популяции независимо от состояния семейного анамнеза заболевания могут играть роль генетические факторы, в частности, полиморфные варианты гена ORAI1.

ЛИТЕРАТУРА

1. Тиктинский О.Л., Александров В.П. Мочекаменная болезнь. СПб.: Питер, 2000. 384 С.

2. Избранные лекции по урологии [Под ред. Лопаткина Н. А., Мартова А. Г.] М.: Литтерра; 2008. 573 с.

3. Аполихин О.И., Сивков А.В., Москалева Н.Г., Солнцева Т.В., Комарова В.А. Анализ урологической заболеваемости и смертности в Российской Федерации за десятилетний период (2002-2012 гг.). // Экспериментальная и клиническая урология. 2014. N 2. C. 4-12.

4. Tiselius HG. Patients attitudes on how to deal with the risk of future stone recurrences. // Urol Res. 2006. Vol.34, N 4. P. 255-260. 5. Pasch A. Metaphylaxis of recurrent renal calcium stones. // Ther Umsch. 2007. Vol. 64, N 5. P. 253-258.

6. Яненко Э.К., Константинова О.В. Современный взгляд на лечение больных мочекаменной болезнью. // Урология. 2009. N 5. С. 61-64.

7. Лимборская С.А., Сломинский П.А. Молекулярная генетика человека: Медико-генетические и популяционные исследования. // В кн.: Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1. М.: Наука, 2003. C. 307-371.

8. Вартанян М.Е., Снежневский А.В. Клиническая генетика болезней с наследственным предрасположением. // Вестник АМН СССР. 1976. N 7. С. 76-83.

9. Attanasio M. The genetic components of idiopathic nephrolithiasis. // Pediatr Nephrol. 2011. Vol. 26, N 3. P. 337-346.

10. Аполихин О.И., Сивков А.В., Константинова О.В., Сломинский П.А., Тупицына Т.В. Калиниченко Д.Н Поиск полиморфных вариантов кандидатных генов мочекаменной болезни в российской популяции. // Экспериментальная и клиническая урология, 2013. N 3. С. 56-60.

11. Monico C, Weinstein A, Jiang Z. Phenotypic and functional analysis of human SLC26A6 variants in patients with familial hyperoxaluria and calcium oxalate nephrolithiasis. // Am J Kidney dis. 2008. Vol. 52, N 6. P. 1096-1103.

12. Soleimani M. The role of SLC26A6-mediated chloride/oxalate exchange in causing susceptibility to nephrolithiasis. // J Physiol. 2008, Volume 586, N 5. P. 1205-1206.

13. Chou Y, Juo S, Chiu Y. A polymorphism of the ORAI1 gene is associated with the risk and recurrence of calcium nephrolithiasis. // J Urol. 2011. Vol. 185, N 5. P. 1742-1746.