Все хирургические вмешательства без исключения сопряжены с рассечением тканей, механическим нарушением целостности стенок сосудов различных калибров и истечением крови. Следствием является уменьшение объема циркулирующей крови (ОЦК), численности эритроцитов, плазменных концентраций белков и электролитов. Падение ОЦК играет ведущую роль в патогенезе расстройств, вызванных острой кровопотерей, индуцируя снижение венозного возврата к правым отделам сердца, ударного и минутного объема сердца (УО и МОС), артериального давления (АД), линейной скорости протекания крови, в т.ч. в микрососудистом русле. Уменьшение капиллярного кровотока в органах и тканях приводит к недостаточному снабжению их кислородом и питательными веществами, задержке продуктов обмена, что становится причиной тяжелых нарушений функций организма. Активация симпато-адреналовой системы в условиях некорригированной кровопотери сопровождается высвобождением катехоламинов, централизацией кровообращения в тканях с β-адренэргической стимуляцией сосудистых стенок (головной мозг,миокард, печень) и редукцией кровообращения в зонах с α-адренорецепцией (кожа, почки, органы брюшной полости). Компенсаторный переход на анаэробный гликолиз в органах с редуцированнымкровоснабжениемведет к накоплению вазидилатирующих гуморальных агентов (например, протонов водорода, молочной и пировиноградной кислот и др.), расширению сосудов с увеличением проницаемости их стенок, выпотеванию жидкой части крови в ткани, повторному падению ОЦК, замыкающему порочный круг [1].
При острой кровопотере, в т.ч. интраоперационной, сопровождающейся повторными падениями ОЦК, несвоевременное назначение адекватной медикаментозной терапии способно усугубить состояние пациентов за счет присоединения к гемодинамическим расстройствам изменений реологических свойств крови [2], генерализации тромбообразования с развитием в дальнейшем коагулопатии потребления и повышенной кровоточивости [1]. Утрата циркулирующих эритроцитов и гемоглобина в комплексе с повышенной вязкостью крови и низкой линейной скоростью кровотока становится причиной нарушения кислородотранспортной функции крови и гемической анемической гипоксии [3]. Развитие геморрагического шока при утрате 15-20% ОЦК и более представляет собой фактор риска для формирования дыхательной недостаточности, в т.ч., крайне тяжелого ее проявления в виде острого респираторного дистресс-синдрома [4], а также преренальной формы острого почечного повреждения и острого тубулярного некроза ишемического происхождения [5].
Задачей первостепенной важности при лечении острой кровопотери и ее последствий является восстановление ОЦК посредством инфузионно-трансфузионной терапии, условием успешности является достоверное определение объема излившейся крови [6].
Для определения объема интраоперационной кровопотери (ИК) было предложено довольно много методов: гравиметрический (сопоставление массы хирургического материала (салфеток, тампонов и др.) чистого и пропитанного кровью или массы тела пациента до и после вмешательства); непрямые способы (введение в кровь пациента до и после операции соединений-индикаторов для определения объема циркулирующих эритроцитов и плазмы, затем сравнение полученных данных); бескровная методика определения ОЦК по методу Н.М. Шестакова, где используется интегральная реография [7] и др. В настоящее время объем кровопотери чаще всего рассчитывают: 1) по методу Moore (требует данных о величине гематокрита и ОЦК); 2) с помощью формулы для вычисления шокового индекса Альговера-Бурри [8].
Одним из старейших является колориметрический метод, в основе которого лежит определение объема ИК по количеству гемоглобина в промывной среде. Ход определения начинается с отмывания от крови использованного хирургического материала (салфетки, тампоны и т.д.) в определенном объеме воды и присоединения к этому объему содержимого емкости отсоса, далее измеряется суммарный объем полученной жидкости (Vж) и концентрация гемоглобина в нем ([Hb]ж). Затем объем интраоперационной кровопотери (Vик) вычисляется по формуле: Vик=Vж*[Hb]ж / [Hb]крови до операции.
Невозможно отрицать безупречную логику и простоту этого старейшего оригинального метода определения объема ИК [9-11], но в той же степени невозможно отрицать негативную роль «человеческого фактора» на преаналитическом этапе данного исследования, предопределяющего высокую вероятность диагностических ошибок при применении данной методики.
Целью настоящей работы явилось усовершенствование технологии определения объема интраоперационной кровопотери, используя гемихромный метод определения концентрации гемоглобина в аспирируемой (промывной) среде.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Представленный нами способ, предназначен для лабораторного измерения объема ИК, возникшей вследствие повреждения сосудов во время эндовидеохирургических вмешательств в урологической практике.
Базисом при разработке предлагаемого способа послужили следующие обстоятельства:
Алгоритм пробоподготовки/преаналитического этапа включает в себя следующие процедуры во время операции: подготовку промывающей среды, аспирацию/ ирригацию зоны операционных действий, сбор ПВ, измерение и тщательное перемешивание всего объема смыва, отбор аликвоты в вакутейнер, маркировку, транспортировку в лабораторию, хранение (при возможности отсроченного выполнения исследования). Кроме того, для каждого пациента перед вмешательством должен быть определен дооперационный уровень гемоглобина в крови (в рамках общеклинического анализа крови перед проводимой операцией).
В процессе аналитического этапа: во-первых, измеряется концентрация гемоглобина в ПВ и абсолютное количество Hb во всем объеме ПВ; во-вторых – рассчитывается объем ИК.
Для определения концентрации гемоглобина в ПВ нами был выбран гемихромный метод (ГХМ), который разработали и представили в 1989 г. А.А. Ахрем и соавт. [12]. ГХМ «… с одной стороны, полностью сопоставим с гемоглобинцианидным методом (ГЦМ) по надежности, воспроизводимости и чувствительности, с другой – выгодно отличается от ГЦМ отсутствием среди реагентов токсичных цианистых соединений, меньшим временем проведения анализа (5 минут против 20 минут) и большей производительностью, более длительным сроком годности трансформирующего раствора (6 месяцев против 3 месяцев)…» [12]. Приборы, оборудование и реагенты, необходимые для определения концентрации Hb с помощью ГХМ, выпускаются медицинской промышленностью серийно и имеются практически в каждой клинико-диагностической лаборатории [13].
Принцип гемихромного метода определения концентрации гемоглобина: в реакции между трансформирующим раствором и всеми тремя формами Hb (А, А2 и F) происходит превращение HbА, HbА2 и HbF в окисленную низкоспиновую форму – гемихром (HbChr), имеющую максимум поглощения в области 540 нм, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе [12,13].
В качестве реагента, переводящего Hb в HbChr, нами был использован додецилсульфат натрия (SDS), малотоксичный и безопасный в применяемых концентрациях, не требующий специальных условий хранения, транспортировки и утилизации. Для измерения оптической плотности применяли анализатор биохимический фотометрический кинетический АБхФк-02-«НПП-ТМ» (Россия, НПП «Техномедика», 2014 г.), свидетельство о поверке № 0037330 от 25.03.2020 г. Измерения проводили при длине волны 540 нм в стеклянной кювете с длиной оптического пути, равной 10 мм.
В ходе определения концентрации гемоглобина в промывных водах к аликвоте ПВ, объем которой составляет 4 мл, добавляется 5 мг SDS, смесь перемешивается до полного растворения вещества и лизиса эритроцитов, выдерживается в течение 2-3 минуты, затем центрифугируется в течение 2 минут при скорости 1500×g. Точно через 5 минут после центрифугирования в кювету (с длиной оптического пути, равной 10 мм) анализатора вносили 1 мл супернатанта и измеряли абсорбцию при λ=540 нм против контрольной пробы (в 4 мл промывной среды растворяется 5 мг реагента).
Расчет объема интраоперационной кровопотери: молярный коэффициент экстинции гемихрома составляет 10,14 при λ=540 нм. Фактор для вычисления уровня гемоглобина гемихромным методом равняется 398 при стандартном разбавлении крови в 251 раз. Так как в образцах кровь уже разбавлена, то использование стандартной методики с разведением 20 мкл крови в 5 мл трансформирующего реагента не представляется возможным, потому что полученные значения абсорбции будут находиться ниже предела обнаружения гемоглобина гемихромным и любым другим спектроскопическим методом, в видимой зоне поглощения 500-575 нм. В связи с этим реакцию проводят, добавляя сухой реагент к фиксированному объему тщательно перемешанного образца для растворения, перевода гемоглобина в гемихром и последующей фотометрии. Таким образом, фактор для вычисления уровня гемоглобина в промывных водах равен 398/251=1,586.
Уравнение для вычисления объема кровопотери имеет следующие компоненты:
В исследовании приняли добровольное участие 147 пациентов в возрасте от 49 до 67 лет, находивших на стационарном лечении в урологическом отделении Санкт-Петербургского ГБУЗ «Клиническая больница Святителя Луки» в период с декабря 2018 г. по август 2019 г. по поводу различных заболеваний урологического профиля, требующих хирургического вмешательства.
Для оценки воспроизводимости предлагаемого способа у 34 пациентов мужского пола с помощью уравнения, представленного выше, рассчитывали объем интраоперационной кровопотери, затем вычисляли ежедневную внутрисерийную (n=28) и межсерийную (n=10) прецизионность.
Во второй части исследования изучаемый способ применяли для определения объема интраоперационной кровопотери в условиях трансуретральной резекции доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ТУР ДГПЖ), трансуретральной энуклеация предстательной железы (ПЖ) биполяром (TUEB), тулиевой лазерной энуклеации ПЖ (ThuLEP). Параллельно, объем ИК рассчитывали по следующей формуле: Vик = СHb в ПрС х Vd / СHb кр., где Vик – объем интраоперационной кровопотери, Vd – объем промывной среды, полученной от пациента, СHb в ПрС и СHb кр. – концентрация гемоглобина в промывной среде и в крови (до операции), при этом для измерения уровня анализа гемоглобина в рассматриваемых биологических жидкостях использовали фотометрический гемоглобинцианидный метод.
Для проведения второй части исследования все добровольные участники (n=113) были разделены на 3 группы. В группу 1 было включено 35 (30,97%) человек, объем ПЖ которых варьировал от 30-40 до 60-80 см3. В группы 2 и 3 вошли 62 и 16 (54,87% и 14,16%) пациентов, соответственно, у этих лиц объем ПЖ составлял 60-80 – 150-200 см3 .
Хирургическое лечение ДГПЖ в группе 1 осуществляли посредством ТУР ПЖ, в группе 2 выполняли трансуретральную энуклеацию предстательной железы биполяром, в группе 3 – тулиевую лазерную энуклеацию ПЖ.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В таблице 1 представлены данные, полученные при индивидуальном определении объема интраоперационной кровопотери по концентрации гемоглобина в ПВ у больных (n=34), перенесших различные лапароскопические урологические вмешательства. Эти данные были использованы для вычисления внутрисерийной и межсерийной прецизионности (табл. 2).
Таблица 1. Объем интраоперационной кровопотери
Table 1. Volume of intraoperative blood loss
№ п/п Serial number |
Концентрация гемоглобина в крови до операции (г/л) Hemoglobin concentration in the blood before surgery (g / L) |
Объем промывных вод (л) Volume of washing water (L) |
Концентрация гемоглобина в промывных водах (г/л) Hemoglobin concentration in wash water (g/L) |
Содержание гемоглобина во всем объеме промывных вод (г) Hemoglobin content in the entire volume of wash water (g) |
Объем кровопотери (л) Volume of intraoperative blood loss (L) |
---|---|---|---|---|---|
1 | 143 | 20 | 5,392 | 107,83 | 0,754 |
2 | 148 | 32 | 2,111 | 8,44 | 0,057 |
3 | 148 | 32 | 4,974 | 159,16 | 1,075 |
4 | 145 | 15 | 5,298 | 79,48 | 0,548 |
5 | 137 | 10 | 0,879 | 8,79 | 0,064 |
6 | 150 | 27 | 0,177 | 4,78 | 0,032 |
7 | 151 | 30 | 1,814 | 54,43 | 0,36 |
8 | 147 | 30 | 1,122 | 33,67 | 0,229 |
9 | 149 | 30 | 0,477 | 14,3 | 0,096 |
10 | 129 | 30 | 0,618 | 18,54 | 0,144 |
11 | 129 | 30 | 1,291 | 38,74 | 0,300 |
12 | 145 | 20 | 0,699 | 13,97 | 0,096 |
13 | 134 | 30 | 1,498 | 44,93 | 0,335 |
14 | 143 | 13 | 5,297 | 68,86 | 0,482 |
15 | 138 | 30 | 1,59 | 47,71 | 0,346 |
16 | 147 | 24 | 0,793 | 19,02 | 0,129 |
17 | 125 | 30 | 0,416 | 12,47 | 0,1 |
18 | 137 | 40 | 1,108 | 44,33 | 0,324 |
19 | 153 | 65 | 0,937 | 60,88 | 0,398 |
20 | 153 | 65 | 0,957 | 62,21 | 0,407 |
21 | 138 | 30 | 0,735 | 22,04 | 0,16 |
22 | 127 | 30 | 1,586 | 47,57 | 0,375 |
23 | 138 | 30 | 1,018 | 30,55 | 0,221 |
24 | 138 | 45 | 2,305 | 103,71 | 0,752 |
25 | 138 | 15 | 0,954 | 14,31 | 0,104 |
26 | 152 | 60 | 1,523 | 91,4 | 0,601 |
27 | 152 | 60 | 0,959 | 57,53 | 0,378 |
28 | 138 | 30 | 1,494 | 44,83 | 0,325 |
29 | 138 | 30 | 1,747 | 52,42 | 0,38 |
30 | 138 | 30 | 1,277 | 38,3 | 0,278 |
31 | 138 | 30 | 0,924 | 27,71 | 0,201 |
32 | 138 | 30 | 1,554 | 46,61 | 0,338 |
33 | 146 | 25 | 0,568 | 14,19 | 0,097 |
34 | 154 | 18 | 0,999 | 17,98 | 0,117 |
Таблица 2. Внутрисерийная и межсерийная прецизионность предлагаемого способа
Table 2. Intra-series and inter-series precision of the proposed method
Название способа The name of the method |
Прецизионность % Precision % |
|
---|---|---|
внутрисерийная in-series |
межсерийная inter-series |
|
Количественное определение величины кровопотери (л) по концентрации гемоглобина в промывной среде Quantitative determination of blood loss (l) on the hemoglobin concentration in the wash medium hemichromis method | 0,37±0,04 n=28 |
2,85±0,50 n=10 |
Данные, представленные в таблице 1 и таблице 2, свидетельствуют о высокой воспроизводимости способа в одной и той же и различных аналитических сериях, а также приемлемости результатов при внутрилабораторном контроле качества.
Таблица 3 содержит сведения об усредненных результатах вычисления объема ИК по концентрации гемоглобина в промывных водах, определявшейся гемихромным и гемоглобинцианидным методами.
Таблица 3. Объем интраоперационной кровопотери в условиях хирургического лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы
Table 3. Volume of intraoperative blood loss in conditions of surgical treatment of benign prostatic hyperplasia
Объем ПЖ (см3) Рrostate volume (cm3) |
Время операции (M±σ, мин) Surgery time (M±σ, min.) |
Объем интраоперационной кровопотери (по концентрации гемоглобина в промывной среде): методы определения, результаты Volume of intraoperative blood loss (by the concentration of hemoglobin in the wash medium): methods of determination, results (M±σ, ml): |
p | |
---|---|---|---|---|
гемихромный hemicrany |
гемоглобинцианидный hemoglobin cyanide |
|||
Трансуретральная резекция доброкачественной гиперплазии предстательной железы (n=35) Transurethral resection of benign prostatic hyperplasia (n=35) |
||||
30-40 | 24,26±5,32 | 236,36±21,27 | 234,33±35,18 | 0,709 |
40-60 | 47,26±8,42 | 272,35±38,12 | 276,29±41,52 | 0,258 |
60-80 | 68,44±9,21 | 302,37±19,26 | 299,16±39,37 | 0,473 |
Трансуретральная энуклеация предстательной железы биполяром (n=62) Bipolar transurethral enucleation of the prostate (n=62) |
||||
80-150 | 75,24±11,36 | 67,26±14,23 | 69,08±64,11 | 0,521 |
150-200 | 152,64±26,14 | 176,33±24,42 | 175,56±57,28 | 0,590 |
Тулиевая лазерная энуклеация предстательной железы (n=16) Tulium laser enucleation of the prostate (n=16) |
||||
80-150 | 74,23±16,36 | 62,38±11,08 | 57,29±12,43 | 0,091 |
150-200 | 118,22±24,61 | 106,57±23,19 | 109±22,31 | 0,243 |
Согласно данным таблицы 3, при лечении ДГПЖ посредством применения лапароскопических технологий ТУР ПЖ, TUEB и ThuLEP, показатели объема интраоперационной кровопотери, в конечном итоге, определяемые по концентрации гемоглобина в промывной среде гемихромным и гемоглобинцианидным методами (ГХМ и ГЦМ, соответственно), во-первых, не имели статистически значимых различий между собой в каждой из рассмотренных градаций (объем ПЖ, вид и продолжительность вмешательства), вовторых – были полностью сопоставимы с опубликованными в специализированной медицинской периодике результатами определения объема ИК в аналогичных ситуациях, основанного на измерении уровня гемоглобина в промывных водах гемоглобинцианидным методом.
В Российской Федерации гемоглобинцианидный метод был рекомендован в качестве унифицированного метода определения гемоглобина в биологических жидкостях соответствующим Приказом в 1974 г. (Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 5 октября 1974 г. №960 «Об унификации клинических лабораторных методов исследований» п. 2.1.1) [14].
Установлено, что гемоглобинцианидный и гемихромный методы определения гемоглобина в биологических жидкостях имеют следующие совпадающие характеристики: 1) длина волны, необходимая для измерения оптической плотности; 2) линейная область измерения; 3) чувствительность; 4) соотношение «реагент-проба»; 5) коэффициент вариации; 6) температура проведения анализа
Однако, кроме этих совпадающих характеристик, между двумя означенными методами существует ряд различий, важнейшими из которых являются, во-первых, время анализа (5 минут для ГХМ и 20 минут при определении гемоглобина в биологических пробах гемоглобинцианидным методом); во-вторых – высокая токсичность основного реагента ГЦМ и отсутствие таковой в применяемых концентрациях для реагента ГХМ додецилсульфата натрия; в-третьих – срок годности трансформирующего раствора (ТР), а именно 3 месяца для ТР из наборов ГЦМ и 6 месяцев для ТР из наборов для гемихромного метода.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Точность, простота, экономичность и безвредность при количественном определении величины кровопотери по концентрации гемоглобина в промывной среде, измеряемой гемихромным методом, позволяют рекомендовать данный способ для клинического применения во время эндовидеохирургических вмешательств в урологии.
ЛИТЕРАТУРА
Прикрепленный файл | Размер |
---|---|
Скачать статью | 244.74 кб |